毕竟小鼠有可能会抓挠,因而针对小鼠的VNS中,电极直接接触神经干、以确保刺激效率。
最后,通过双光子实时成像采集eGFP强度。
而量化指标,胆碱能神经元激活率看eGFP和区域荧光强度变化;黏液分泌看tdTomato与囊泡出胞速率……
最终,得出结论:VNS组,刺激后十分钟,肠神经丛eGFP强度暴涨三倍,意味着胆碱能神经元被VNS手术激活。
同时,杯状细胞tdTomato信号爆发,黏液分泌速率提升四倍!
而相比之下,假手术组,则没有这些变化。
阿托品组由于有拮抗剂的存在,上述效应完全被阻断。
至此,足以证明VNS通过胆碱能通路促粘液分泌!
“接着就是VNS驱动阿克曼菌特异性定植了……”
此时,众人的心里更加紧张。
这是重中之重。
也是决定一切的关键!
如果能证明VNS可以增加阿克曼菌,这次的实验,就成功了一大半!
相反,若是得到相反的结果,恐怕之前的所有猜想都没有意义了。
“这次用的是什么小鼠?”
众人看向许秋。
许秋给出了介绍:“人源化菌群小鼠。
“具体来说,是无菌C57B-L/6小鼠灌胃健康人粪便菌液,其中含0.001%阿克曼菌。”
这等于是为此次试验量身定做的小鼠。
若非这里是协和,各种实验动物模型都能找到,可能仅仅是培育,就要数周的时间!
这也就是大平台的优势了。
换做是在临医,恐怕根本没法提供所需的各种实验动物!
许秋即便想要验证,可能也要当场自己选育、培养对应的小鼠,等真正做实验的时候可能已经是数个月之后的事情了。
而除开实验动物,此次所用的菌群追踪技术也尤为关键。
许秋在考察了协和研究所这边拥有的设备后,最终选定了FISH时空定位。
探针,选取的是Akk-405。
阿克曼菌-16S-rRNA-Cy5标记探针。
黏液层定位,则是WGA-Alexa488标记黏蛋白。
相比之下,成像方案就非常简单粗暴了。
直接麻醉下、经钢门插入共聚焦纤维内镜,动态拍摄回肠末端,直接观察菌群。
“这套方案也堪称完美了。”
此时,了解到许秋的具体实验规划后,莫雷蒂等人都啧啧称奇。
实验室普遍的手法,是16S测序。